BÀI 2. THỰC HÀNH TÁCH CHIẾT DNA

I. CHUẨN BỊ

- Dụng cụ: Cối sứ, chày sứ, vải lọc (hoặc rây), dao nhỏ, cốc thuỷ tinh, đũa thuỷ tinh, ống nghiệm, giá đỡ ống nghiệm, pipette, que tre (hoặc tăm tre) nhỏ.

- Hoá chất: Nước rửa bát, nước cất lạnh, cồn ethanol 70% lạnh, dung dịch diphenylamine.

- Mẫu vật: Mô thực vật (cải thìa, xà lách) hoặc mô động vật (gan gà hoặc gan lợn tươi), quả dứa còn xanh.

II. CÁCH TIẾN HÀNH

- Bước 1: Chuẩn bị mẫu vật, bao gồm dịch chiết nước dứa và dịch chiết mô (thực vật hoặc động vật).

- Bước 2: Tách chiết DNA: Loại bỏ các thành phần không cần thiết để giải phóng DNA.

- Bước 3: Kết tủa DNA: Lắng xuống để thu nhận DNA từ tế bào mẫu.

- Bước 4: Nhận biết DNA: Quan sát trực tiếp hoặc sử dụng thuốc thử để xác định có DNA hay không.

IV. THU HOẠCH

BÁO CÁO THỰC HÀNH

1. Mục đích thực hiện thí nghiệm.

Thực hành tách chiết được DNA từ các mẫu vật có sẵn.

2. Kết quả và giải thích

a) Kết quả tách chiết và nhận biết DNA: Thu được kết tủa DNA màu trắng.

b) Giải thích:

- Quá trình cắt nhỏ và giã nhuyễn gan (hoặc cải) phá vỡ tế bào để giải phóng DNA.

- Nước rửa bát và dịch chiết nước dứa phá vỡ mô và màng tế bào, giải phóng dịch nhân tế bào vào dung dịch chiết.

- Ethanol lạnh được thêm vào hỗn hợp để kết tụ DNA lại thành kết tủa màu trắng, do ethanol có ái lực với nước mạnh hơn với DNA.

- Khi lấy DNA bằng tăm tre cần khuấy nhẹ vì DNA đã kết tủa dễ đứt gãy.

3. Kết luận

- Tách chiết DNA là quy trình quan trọng trong nghiên cứu sinh học, yêu cầu thực hiện cẩn thận để đảm bảo chất lượng DNA và tránh nhiễm phụ.

- Đeo bao tay và mặc đồ bảo hộ là cần thiết để tránh nhiễm DNA từ môi trường bên ngoài và đảm bảo sự chính xác của các thí nghiệm tiếp theo.

- Lựa chọn mẫu vật phù hợp và lưu trữ đúng cách trước khi tiến hành tách chiết DNA.

- Nghiền mẫu một cách kỹ lưỡng để đảm bảo phá vỡ mô và tế bào đồng đều.

- Sử dụng dung dịch tách chiết phù hợp với loại mẫu và mục đích cụ thể của nghiên cứu.

- Sau khi tách chiết, thực hiện các bước làm sạch để loại bỏ protein và RNA có thể ảnh hưởng đến các thí nghiệm tiếp theo.

- Đánh giá hiệu suất tách chiết bằng các phương pháp như đo OD, điện di trên gel agarose, hoặc PCR để đảm bảo chất lượng và số lượng DNA thu được.