Hình 1 mô tả quá trình tạo giống ngô chuyển gene Cry mã hoá cho protein ð-endotoxin có tác dụng diệt côn trùng gây hại từ vi khuẩn B.thuringensis...

a)    Để tách DNA từ tế bào vi khuẩn, người ta thường thực hiện các bước sau:

-       Ly tâm: Tế bào vi khuẩn được ly tâm để tách bỏ phần môi trường nuôi cấy.

-       Phá vỡ tế bào: Sử dụng hóa chất (như dung dịch lysis) hoặc nhiệt để phá vỡ màng tế bào và giải phóng DNA.

-       Loại bỏ protein và RNA: Thêm enzyme như protease và RNase để tiêu hóa protein và RNA, không để chúng làm ô nhiễm mẫu DNA.

-       Tách DNA: Sử dụng dung dịch muối và cồn (ethanol hoặc isopropanol) để tách DNA ra khỏi các thành phần còn lại của tế bào.

b)    Để chuyển plasmid tái tổ hợp vào tế bào thực vật, có thể sử dụng các phương pháp sau:

●       Biến nạp gián tiếp thông qua Agrobacterium: Sử dụng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens hoặc Agrobacterium rhizogenes, chứa plasmid Ti (tumor inducing plasmid), để chuyển gen ngoại lai vào tế bào thực vật.

●       Biến nạp trực tiếp:

-       Điện tách (Electroporation): Sử dụng xung điện để tạo lỗ tạm thời trên màng tế bào, cho phép plasmid đi vào tế bào.

-       Tiêm trực tiếp (Microinjection): Sử dụng một kim siêu nhỏ để tiêm trực tiếp plasmid vào tế bào.

-       Sử dụng muối CaCl2: Phương pháp này làm dãn màng sinh chất của tế bào, giúp plasmid chui qua màng vào trong tế bào.

c)    Để chọn lọc các dòng tế bào thực vật mang gene diệt côn trùng, người ta có thể sử dụng các phương pháp sau:

-       Sử dụng chất chọn lọc: Các tế bào thực vật chuyển gen thường được đưa vào môi trường có chứa chất chọn lọc như một loại thuốc trừ cỏ hoặc kháng sinh. Chỉ những tế bào đã tích hợp thành công gene diệt côn trùng và gene kháng chất chọn lọc mới có khả năng phát triển.

-       Phân tích PCR: Sử dụng phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) để kiểm tra sự hiện diện của gene diệt côn trùng trong DNA của tế bào thực vật.

-       Phân tích biểu hiện protein: Kiểm tra sự biểu hiện của protein độc tố trong tế bào thực vật bằng các phương pháp như ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

d)    Việc tái sinh cây ngô chuyển gene có thể được thực hiện thông qua các bước sau:

-       Nuôi cấy tế bào: Sử dụng tế bào huyền phù của ngô để nuôi cấy trong môi trường đặc biệt, thường là chứa hormone thực vật để kích thích sự phân chia và tái sinh tế bào1.

-       Tạo sóng siêu âm: Áp dụng sóng siêu âm với tần số cao có thể giúp tăng cường khả năng thâm nhập của ADN vào protoplast1.

-       Nuôi cấy protoplast: Protoplast sau khi đã nhận ADN sẽ được nuôi cấy để tái sinh thành cây hoàn chỉnh.

-       Chọn lọc cây chuyển gene: Sử dụng các phương pháp chọn lọc để xác định những cây đã thành công trong việc tích hợp gene chuyển

e)    Một số nghiên cứu chỉ ra rằng thực phẩm chuyển gene có thể mang lại lợi ích như tăng cường khả năng kháng bệnh của cây trồng và giảm sự phụ thuộc vào thuốc trừ sâu, có thể dẫn đến giảm tiếp xúc với hóa chất độc hại cho con người. Tuy nhiên, cũng có quan ngại về khả năng vô tình đưa những chất gây dị ứng hoặc làm giảm dinh dưỡng vào thực phẩm, cũng như khả năng phát tán gen biến đổi sang các loài thực vật hoang dã.

⇨    Tóm lại, việc sử dụng cây ngô chuyển gene có thể có cả lợi ích và rủi ro tiềm ẩn. Việc đánh giá chính xác ảnh hưởng đến sức khỏe con người đòi hỏi sự nghiên cứu khoa học kỹ lưỡng và cân nhắc từ nhiều khía cạnh khác nhau.